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荧光光谱仪怎么设置?

发布时间: 2022-10-26 10:21

荧光光谱仪是一种用于扫描液体荧光标记物发出的荧光光谱的仪器。它可以提供许多物理参数,包括激发光谱、发射光谱、荧光强度、量子产率、荧光寿命、荧光偏振等。从各个角度反映了分子的成键和结构。那么荧光光谱仪怎么设置呢?下面来解答一下!

1、激发波长的选择

如何确定激发波长和发射波长?对于许多乐器初学者来说,这是一个令人困惑的问题。如果仪器有三维扫描功能,就比较简单了。把样品放进去,按照说明做三维荧光扫描,可以很容易的确定合适的激发波长和发射波长。如果仪器没有3D扫描功能,一般方法如下。

首先将仪器的激发波长(λem)设置为200nm,然后进行发射(EM)模式扫描,发射波长(λEM)的扫描范围暂定为210 ~ 800 nm,记录所有的峰值波长。更改激发波长(λem ),然后扫描。如果在第二发射光谱中的某个峰(或多个峰)的位置没有位移(或位移很小),一般来说,该峰(或多个峰)是荧光峰;因为荧光峰的位置不随激发波长的变化而变化,只是峰高(或峰面积)发生变化。

然后,将确定的荧光峰的波长固定为发射波长(λem),然后扫描激发波长(Ex),其范围小于发射波长;如果只有一个激发峰,很容易建立起来,然后固定这个波长再做一次真实发射波长(EM)扫描,就可以得到很好的信噪比。如果扫描激发波长(EX)后出现几个峰,应根据经验选择。一般应选择峰形、适宜性高、有一定带宽的峰作为激发波长。激发波长也可以通过参考荧光光谱的特性-激发光谱和发射光谱的镜像来确定。

2、过滤器的选择

当扫描和分析发射光谱时,根据斯托克斯定律,设定的激发波长比发射波长短。例如,如果激发波长λex=260nm,则发射起始波长应该从大于260nm的波长开始,例如270nm,发射终止波长应该是870nm。这样,在激发光的两倍(520nm)和三倍(780nm)处会出现激发波长的尖锐倍频峰。如果与荧光光谱峰重叠,会对测试产生干扰,所以需要选择合适的滤光片将其滤除。

倍频峰是激发光的散射峰。虽然扫描到两倍波长时出现波长,但实际波长是激发波长。可以通过添加高通滤波器来消除倍频峰值。一般高通滤波器放在发射处,芯片上标有能滤出的最大波长。也就是说,在系统中加入高通滤波器后,比上面标注的波长更低的光,包括这些光的双波长光和三波长光,都会被过滤掉;而波长高于其标示波长的光可以顺利通过。

3、狭缝的设置

荧光强度与许多因素有关,如分子结构、存在状态、溶液浓度或薄膜厚度、温度、选择的激发波长、测试狭缝的宽度等。不同仪器测得的荧光强度值差异较大,不具有可比性,但其峰值位置容易确定,可以用来判断是哪种物质。定量荧光分析必须固定一些条件。

狭缝的大小对荧光强度非常重要。狭缝的大小可以根据被测物质的荧光强度进行适当调整。在相同浓度下,如果荧光强度过高,超出仪器的测量范围,可以减小狭缝。但是,需要指出的是,荧光强度的变化不仅仅是狭缝的大小,还有分辨率。对于荧光扫描,狭缝的增加可以提高荧光强度和重现性,但分辨率下降。确定狭缝的分辨率,仪器的其他结构已经固定(光栅刻线数量、焦距、综合线性色散系数),狭缝的大小决定了分辨率。对于实际应用,狭缝尺寸需要与测量峰的半峰宽相匹配。如果太大,峰会变形。狭缝的大小也决定了光通量。根据经验值,狭缝扩大1倍,光通量会增加4倍。

4、步长设置

测量步长越小,测量越慢,地图越细腻;步长越长,测量速度越快,谱图越粗糙。步长应小于待测最小FWHM的1/5,因为步长与分辨率有关。原则上,步长应小于狭缝宽度的3倍。

以上是关于荧光光谱仪怎么设置的介绍,如你想了解更多,请继续浏览荧光光谱仪新闻栏目,如你想了解产品,可在线咨询或电话联系我们!

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常见问题

气相色谱仪哪家好呢?

气相色谱仪是一种常用的分析仪器,广泛应用于化学、生物、医药等领域。但是,市面上的气相色谱仪品牌众多,价格也相差甚远,让人难以选择。那么,气相色谱仪哪家好呢?

首先,我们需要了解气相色谱仪的基本原理和性能指标。气相色谱仪是利用样品在高温下蒸发成气态,通过柱子分离,再通过检测器检测不同组分的分离程度和含量。常见的性能指标包括分离度、灵敏度、线性范围、重复性等。

在选择气相色谱仪品牌时,我们可以从以下几个方面考虑:

1. 品牌知名度和口碑。知名品牌通常有较高的技术实力和售后服务保障,口碑也更好。

2. 技术创新和研发能力。气相色谱仪技术不断更新换代,具有较强的研发能力和技术创新能力的品牌更有竞争力。

3. 产品性能和价格。不同品牌的气相色谱仪性能和价格差异较大,需要根据实际需求和预算进行选择。

4. 售后服务和技术支持。气相色谱仪使用过程中可能会出现各种问题,售后服务和技术支持能够及时解决问题,保障仪器正运行。

RoHS光谱仪服务哪家好?

RoHS光谱仪是一种用于检测产品中有害物质的仪器,它可以检测出产品中是否含有铅、汞、镉、六价铬等有害物质,以保障人类健康和环境安全。那么,RoHS光谱仪服务哪家好呢?

首先,我们需要了解RoHS光谱仪的基本原理和检测方法。RoHS光谱仪是一种基于光谱分析原理的仪器,它可以通过分析样品中的元素和化合物,来判断样品中是否含有有害物质。RoHS光谱仪的检测方法一般是X射线荧光光谱法(XRF)。

使用什么仪器来检测电子电器产品中的RoHS?

RoHS(限制使用某些有害物质指令)是欧盟制定的一项法规,旨在限制电子电器产品中使用有害物质的含量。这些有害物质包括铅、汞、镉、六价铬、多溴联苯和多溴联苯醚等。为了确保产品符合RoHS法规,需要使用特定的仪器进行测试。

RoHS测试仪器是一种专门用于检测电子电器产品中有害物质含量的设备。这些仪器可以检测产品中的铅、汞、镉、六价铬、多溴联苯和多溴二苯醚等有害物质的含量。RoHS测试仪器通常使用X射线荧光光谱仪(XRF)进行测试的。

ROHS检测是什么?

ROHS检测,全称为限制使用某些有害物质(Restriction of Hazardous Substances)检测,是指对电子电气产品和电线电缆产品中特定有害物质的含量进行测试,以确保产品符合相关法规和标准,从而保护消费者和环境免受有害物质的影响。

ROHS检测的起源可以追溯到2003年欧洲联盟发布的《限制使用某些有害物质指令》(RoHS指令),该指令要求在欧洲市场销售的电子电气产品和电线电缆产品中,对铅(Pb)、汞(Hg)、镉(Cd)、六价铬(Cr6+)、多溴联苯(PBB)和多溴联苯醚(PBDE)等有害物质含量进行限制,并要求企业对其产品的含量进行检测。

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